近年來(lái)，
熒光-PCR法技術(shù)有了重大改進(jìn)。將傳統(tǒng)PCR檢測(cè)模式中的PCR擴(kuò)增和檢測(cè)相結(jié)合（即在同一個(gè)密閉容器中將PCR擴(kuò)增反應(yīng)與熒光標(biāo)記探針檢測(cè)結(jié)合在一起）檢測(cè)目的核酸的檢驗(yàn)方法紛紛出臺(tái)。這樣的檢測(cè)方法稱(chēng)為“實(shí)時(shí)”PCR，表示PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可被實(shí)時(shí)檢測(cè)。準(zhǔn)確地說(shuō)，“實(shí)時(shí)”是指在每一個(gè)PCR循環(huán)后檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，我們可得到每個(gè)樣品的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物變化曲線。通過(guò)分析這些反應(yīng)曲線，不但可得到病原體的定性檢測(cè)結(jié)果，還可對(duì)病原體的數(shù)量進(jìn)行精確定量。
實(shí)時(shí)熒光-PCR法不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于應(yīng)用了熒光探針，可通過(guò)光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化以獲得定量結(jié)果，所以還具有DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高準(zhǔn)確性，克服了常規(guī)PCR的許多缺點(diǎn)。
熒光-PCR法相比較普通PCR模式的優(yōu)勢(shì)：
1.由于實(shí)時(shí)熒光PCR采用封閉的檢測(cè)模式，因此擴(kuò)增產(chǎn)物導(dǎo)致污染的可能性比普通PCR要小得多。
2.由于擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)在PCR擴(kuò)增過(guò)程中同時(shí)進(jìn)行，并且數(shù)據(jù)的采集、分析全部由儀器自動(dòng)完成，因此整個(gè)檢測(cè)所需的時(shí)間比普通PCR要節(jié)省許多。
3.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)模式功能強(qiáng)大，具備定性、定量、突變、多項(xiàng)目等檢測(cè)功能。而普通PCR要完成上述項(xiàng)目需采用不同的技術(shù)平臺(tái)。
4.實(shí)時(shí)熒光PCR進(jìn)行定量檢測(cè)時(shí)，其定量線性范圍（5-6 logs）比普通PCR（2-3 logs）要寬得多。
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更新時(shí)間：2023-01-05
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