?
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
黃連堿6020-18-4實驗方法Anti-TNFα Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 染色質(zhì)和核信號 細胞周期蛋白 激酶和磷酸酶

黃芩苷21967-41-9?實驗方法Anti-TNNI2 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學

黃芩素-7-甲醚29550-13-8?*Anti-TNNC1 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 發(fā)育生物學 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導 干細胞 激酶和磷酸酶

萊苞迪苷A58543-16-1實驗步驟Anti-TNNT2 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 通道蛋白

異南五味子丁素140369-76-2價格Anti-TNR Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 表觀遺傳學

毛萼結(jié)晶甲*Anti-TNNT3 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 激酶和磷酸酶

七葉膽皂苷XVII80321-69-3實驗方法Anti-TNXB Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學

榿木酮33457-62-4實驗步驟Anti-TOP2A Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學

羥基紅花黃色素A 78281-02-4 價格Anti Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 神經(jīng)生物學 細胞粘附分子

人參皂甙Rh2 78214-33-2 *Anti-TOLLIP Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 通道蛋白

甜葉懸鉤子苷64849-39-4價格Anti-TOP2A Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 干細胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 結(jié)合蛋白

小檗堿2086-83-1價格Anti-TOR1A Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學 細胞膜蛋白

異牡荊苷29702-25-8*Anti-TP53BP1 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學

14α-羥基Sprengerinin C 1111088-89-1實驗步驟Anti-TP53 Antibody(原貨號PB0076)研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學

4補充中3 848784-87-2實驗步驟Anti-TP63 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 線粒體

2--4-嘧啶  7-乙基喜樹堿  4,4'-聯(lián)苯二

3-基-4-苯胺  鹽酸拓撲替康  1,5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]-5-壬烯(DBN)

Fmoc-D-3-基苯丙酸  9-基喜樹堿  N,N'-二甲基

4-(4-羥基苯基)環(huán)己  7-乙基-10-羥基喜樹堿  2,4-二甲基吡咯

STRONTIUM  金屬鍶  7440-24-6

STRONTIUM OXIDE  氧化鍶  1314-11-0

Strontium oxalate  草酸鍶  814-95-9

Strontium fluoride  化鍶  7783-48-4

大鼠游離甲狀腺激素(FT4)ELISA試劑盒 ，英文名： FT4 ELISA Kit

人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA檢測試劑盒HumanCaspase-9,Casp-9ELISAKit 96T/48T

大鼠白介素1α(IL-1α)免疫試劑盒 Rat Ierleukin 1α ,IL-1α ELISA kit

CLIAKitfoCCC5b-9ELISAKit大鼠末端補體復合物C5b-9規(guī)格：48T/96T

人體hMLH1基因甲基化檢測試劑盒20次

ELISAKitAAA人抗肌動蛋白抗體規(guī)格：48T/96T
牛腎盂腎炎棒桿菌PCR檢測試劑盒價格大鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒英文名稱：Rat phosphatidylisitol antibody IgG/IgM,PI Ab-IgG/IgM ELISA Kit進口/分裝

大鼠硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒英文名稱：Rat thioredoxin reductase,TrxR ELISA Kit*

大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Thioredoxin,Trx ELISA Kit*

大鼠卵巢癌標志物CA125ELISA試劑盒英文名稱：Rat ovarian cancer marker-CA125 ELISA Kit*

大鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Follistatin,FS ELISA Kit進口/分裝

人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒英文名稱：Human hepatitis B virus surface antigen，HBsAg ELISA Kit *

人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)ELISA試劑盒英文名稱：Human hepatitis B virus X interacting protein,HBXIP ELISA Kit進口/原裝