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          當(dāng)前位置:首頁  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測試劑盒  -  50T禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒規(guī)格

          禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒規(guī)格

          產(chǎn)品簡介

          禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒規(guī)格
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          更新時(shí)間:2021-03-14
          訪問次數(shù):496
          詳細(xì)介紹在線留言

          注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

           產(chǎn)品名稱

           禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒規(guī)格

           英文名稱

           Fusarium graminearumPCR

           貨號

           LZP6768

          組成及試劑配制:
          1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
          2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
          3、 樣品稀釋液:1×20ml。
          4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
          5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
          ?
          實(shí)驗(yàn)過程:
          一、試劑準(zhǔn)備
          1. DNA模板
          2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
          3.10×PCR Buffer
          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
          5.Taq酶
          二、操作步驟
          1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
          10×PCR buffer             5μl
          dNTP mixl                 4μl
          引物1(10pM)               2μl
          引物2(10PM)              2μl
          Taq酶(2U/μl)            1μl
          DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
          ddH2O至               50 μl
          PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
          2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
          3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
          4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
          三、注意事項(xiàng)
          1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
          2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
          3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
          4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
          5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
          6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
          7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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          大鼠胰島素樣生長因子1受體Elisa Kit說明書Anti-KLKB1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 表觀遺傳學(xué)

          1,3,5-三(溴甲基)苯

          2,5-二-4-羥基

          二茂鐵甲醛

          異丁酸苯甲酯

          2,3-Butanedione moxime  二乙酰一肟  57-71-6

          Diallyl trisulfide  二烯丙基三硫  2050-87-5

          Salicylaldoxime  肟  94-67-7

          ALPHA-BENZOIN OXIME  安息香肟  441-38-3

          大鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員12(TNFSF12)ELISA試劑盒 ,英文名: TNFSF12 ELISA Kit

          Mouse soluble Endoglin (ENG/sCD105) ELISA Kit 小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA試劑盒

          Mouseeosiphilchemotacticfactor,ECFELISAKit 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

          CLIAKitforHumanImmuglobulinG,IgGELISAKit人免疫球蛋白G規(guī)格:48T/96T

          微型RNA(miRNA)文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)1個(gè)樣本

          ELISAKitMDC/CCL22大鼠巨噬細(xì)胞來源的趨化因子規(guī)格:48T/96T
          禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒規(guī)格豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/SLAⅠ)ELISA試劑盒 英文名稱:swine major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ/SLAⅠ ELISA Kit進(jìn)口/分裝

          豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA試劑盒英文名稱:swine major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡ ELISA Kit進(jìn)口/原裝

          豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/SLAⅢ)ELISA試劑盒英文名稱:swine major histocompatibility complexⅢ,MHCⅢ/SLAⅢ ELISA Kit進(jìn)口/原裝

          豬轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine transforming growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit進(jìn)口/分裝

          豬轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒 英文名稱:Porcine Transforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA Kit進(jìn)口/分裝

          豬組胺(HIS)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine Histamine,HIS ELISA Kit*

          豬組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒英文名稱:Porcine Tissue-type Plasimigen Actilyse,t-PA ELISA Kit進(jìn)口/分裝
          檢測步驟:
          一、 試劑的準(zhǔn)備
          從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
          設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
          試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
          熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
          酶混合物 1 µL N×1 µL
          總量 15 µL N×15µL
          1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
          7.2 qPCR反應(yīng)條件
          將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
          推薦循環(huán)條件:
          1循環(huán) 50℃ for 2 min
          預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
          PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
          60℃ for 60 sec
          60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

           

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