注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
小鼠生長抑素（SS）elisa試劑盒Anti-MYL3/Myosin light chain 3研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞表面分子

人FractalkineElisa Kit圖片Anti-Mesothelioma研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 干細(xì)胞

大鼠果糖胺（FRA）elisa試劑盒Anti-Mitochondrial ribosomal protein L11研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞表面分子 糖蛋白 細(xì)胞類型標(biāo)志物 血管內(nèi)皮細(xì)胞 t-淋巴細(xì)胞 內(nèi)皮細(xì)胞

人N端前腦鈉素（NT-proBNP）elisa試劑盒Anti-Myocardin研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 干細(xì)胞 細(xì)胞表面分子 糖蛋白 細(xì)胞類型標(biāo)志物 t-淋巴細(xì)胞

Hanks緩沖液（HBSS）說明書Anti-MIS12研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 細(xì)胞膜受體 細(xì)胞表面分子 糖蛋白 細(xì)胞類型標(biāo)志物 自然殺傷細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 t-淋巴細(xì)胞 b-淋巴細(xì)胞

乙二胺四乙酸二鈉錳鹽使用說明書Anti-MT-ND1研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號(hào)

A549/DDP（人肺腺癌耐順鉑株）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-MUL1/RNF218研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝

紫花牡荊素479-91-4 價(jià)格Anti-Mast Cell Chymase/CHYMASE研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物

PBS緩沖液說明書Anti-PKC delta研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué)

小鼠α1抗胰糜蛋白酶（AACT）elisa試劑盒Anti-MID1/Midline-1/RNF59研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡

犬催乳素（PRL/LTH）elisa試劑盒Anti-Mammaglobin A研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞膜受體

特級(jí)胎牛血清?現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-MIG6/ERRFI1研究領(lǐng)域  腫瘤 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 上皮細(xì)胞

生物素檢測(cè)試劑盒Anti-ME1研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 藥物及化合物

DMEM高糖 （不含丙酮酸鈉，含HEPES、雙抗）說明書Anti-MTTP研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子

牛血紅蛋白使用說明書Anti-MVK研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞凋亡

阿卡波糖MMP-9(matrix metalloproteinase 9)  基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗原TNFAIP2  腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2(TNFα-IP 2)抗體

阿卡波糖(標(biāo)準(zhǔn)品)MMP-10(matrix metalloproteinase 10)  基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗原TNFAIP1  腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體

阿昔洛韋,無環(huán)鳥苷MPO peptide  髓過氧化物酶抗原TNF β  腫瘤壞死因子-β抗體

阿昔洛韋,無環(huán)鳥苷(標(biāo)準(zhǔn)品)MRP2 (multidrug resistance-associated protein2)  多藥耐藥相關(guān)蛋白2TNF alpha  腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體

腺苷；腺嘌呤核苷MRP5/ABCC5(Multidrug Resistanec-Associated Protein 5)  多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗原TNF alpha  腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體

腺嘌呤核苷（腺苷）（標(biāo)準(zhǔn)品）MrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28)  線粒體核糖體蛋白L28(抗原)TMUB1  跨膜和泛素樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體

鹽酸阿地芬寧MLH1(Mutl homolog l gene)  錯(cuò)配修復(fù)蛋白1抗原TMS1/ASC  凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體

鹽酸阿地芬寧(標(biāo)準(zhǔn)品)MUC5AC/Mucin 5AC(Gastric Mucin M1)  胃粘液素抗原TMPRSS5  跨膜絲氨酸蛋白酶5抗體

醋酸阿拉瑞林/氨瑞林 MTNR1B/MTNR-1B(Melatonin receptor 1B)  褪黑素受體1B抗原TMPRSS4  膜型絲氨酸蛋白酶2抗體

阿侖磷酸鈉MLN(Motilin)peptide  胃動(dòng)素多肽TMIGD1  跨膜TMIGD1蛋白抗體
絲狀支原體簇PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格人γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1毫升

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人ω干擾素(IFN-ω/IFNB)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25毫升

人吖啶橙(AO)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人阿黑皮素原(POMC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。