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          傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒廠家

          產(chǎn)品簡介

          傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒廠家
          上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
          MK檢測試劑盒ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

          更新時(shí)間:2021-03-13
          訪問次數(shù):484
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          ?
          注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

           產(chǎn)品名稱

           傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒廠家

           規(guī)格

           50T

           貨號(hào)

           LZP7526

          實(shí)驗(yàn)過程:
          一、試劑準(zhǔn)備
          1. DNA模板
          2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
          3.10×PCR Buffer
          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
          5.Taq酶
          二、操作步驟
          1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
          10×PCR buffer             5μl
          dNTP mixl                 4μl
          引物1(10pM)               2μl
          引物2(10PM)              2μl
          Taq酶(2U/μl)            1μl
          DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
          ddH2O至               50 μl
          PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
          2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
          3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
          4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
          三、注意事項(xiàng)
          1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
          2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
          3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
          4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
          5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
          6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
          7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
          一、 試劑的準(zhǔn)備
          從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
          設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
          試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
          熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
          酶混合物 1 µL N×1 µL
          總量 15 µL N×15µL
          1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
          7.2 qPCR反應(yīng)條件
          將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
          推薦循環(huán)條件:
          1循環(huán) 50℃ for 2 min
          預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
          PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
          60℃ for 60 sec
          60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
          組成及試劑配制:
          1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
          2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
          3、 樣品稀釋液:1×20ml。
          4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
          5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
          Methyl palmitoleate乙  電子級(jí)苯酮 98%

          Propyl acetate乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.9%(GC)苯酮 99%

          Tetraheptylammonium bromide鹽酸  電子級(jí),37%硫代乙酸 95%

          TBAB HPLC氧化亞錫 AR,99%

          TMD-10 ACS氧化亞錫 99.9% metals basis

          TEAC 電子級(jí),49wt. % in H2O,≥99.99998%metals basis錫酸鈉 CP,53.67% S2

          Tetraethylammonium iodide異 standard for GC,≥99.9% (GC) 錫酸鈉 AR,55.3% S2

          TMAB異 for HPLC, 99.8% 二氧化錫 AR,99.5%

          TMAC異 農(nóng)殘級(jí), 99.9%二氧化錫  ≥99.95% metals basis

          Tetramethylammonium iodide異 P*級(jí)納米二氧化錫  99.9% metals basis,50-70nm

          Tetrabutyl ammonium hydroxide異 用于分子生物學(xué), ≥99.5% (GC) 納米二氧化錫 99.99% metals basis,50-70nm

          TBAC異 for LC-MS, ≥99.9% (GC)二氧化錫 SP

          TBAI異 Plus, for HPLC, 99.9%氯化亞錫 AR,98%

          Ammonium molybdate tetrahydrate甲 電子級(jí)氯化亞錫 ≥99.99% metals basis

          PEP甲 LC-MS,≥99.9%硫酸亞錫 AR,99.0%

          PEP-K甲   色譜級(jí)+, ≥99.9%硫酸亞錫 CP,97.0%

          戊炔草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt3 (62A8) Rabbit mAbLAPTM4B  溶酶體蛋白跨膜β4抗體

          五氯苯甲(標(biāo)準(zhǔn)品)Akt3 (62A8) Rabbit mAbLAPTM4A  溶酶體相關(guān)膜蛋白4α抗體

          乙基對氧磷(標(biāo)準(zhǔn)品)p53 Antibody Sampler KitLAP3  亮氨酸氨基肽酶3抗體

          腐霉利(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-HER4/ErbB4 (Tyr984) AntibodyLAP18/Stathmin  白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體

          吡蚜酮(標(biāo)準(zhǔn)品)ALK (31F12) Mouse mAbLANPL  富含亮氨酸樣酸性核蛋白抗體

          敵稗(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)CIITA AntibodyLangerin/CD207  白細(xì)胞分化抗原CD207抗體

          胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5~3%,酮)SKAR α/β AntibodyLANCL2  G蛋白偶聯(lián)受體69B

          胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=5~3%,酮)Frizzled5 AntibodyLAMR1(CT)  層粘連蛋白受體1抗體(C端)

          抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)α-Amylase (D55H10) XP® Rabbit mAbLAMR1  層粘連蛋白受體1抗體(N端)

          吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml,溶劑:甲)α-Amylase (D55H10) XP® Rabbit mAbLAMP-3/DC-LAMP/CD208  溶酶體相關(guān)膜蛋白3抗體
          傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒廠家G蛋白偶聯(lián)受體GPR161蛋白抗體n-Octylbenzene中文名:別名:分子式:C14H22

          G蛋白偶聯(lián)受體GPR180蛋白抗體1-Indanamine hydrochloride中文名:別名:分子式:C9H12ClN

          G蛋白通路抑制物蛋白2抗體Rasagiline mesylate中文名:甲磺酸雷沙吉蘭別名:分子式:C13H173S

          G蛋白偶聯(lián)受體GPR177蛋白抗體4-Ami-3,5-dichloropyridine中文名:別名:分子式:C5H4Cl2N2

          G蛋白偶聯(lián)受體GPR89A蛋白抗體Roflumilast中文名:羅氟司特別名:分子式:C17H14Cl2F2N2O3

           

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