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          出血性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書

          產(chǎn)品簡介

          出血性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書
          上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
          BJP 檢測(cè)試劑盒其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。

          更新時(shí)間:2021-03-13
          訪問次數(shù):628
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          注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

           產(chǎn)品名稱

           出血性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書

           規(guī)格

           50T

           貨號(hào)

           LZP7523

          組成及試劑配制:
          1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
          2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
          3、 樣品稀釋液:1×20ml。
          4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
          5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
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          實(shí)驗(yàn)過程:
          一、試劑準(zhǔn)備
          1. DNA模板
          2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
          3.10×PCR Buffer
          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
          5.Taq酶
          二、操作步驟
          1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
          10×PCR buffer             5μl
          dNTP mixl                 4μl
          引物1(10pM)               2μl
          引物2(10PM)              2μl
          Taq酶(2U/μl)            1μl
          DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
          ddH2O至               50 μl
          PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
          2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
          3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
          4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
          三、注意事項(xiàng)
          1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
          2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
          3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
          4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
          5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
          6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
          7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
          1,4-Butyrolactone2-噻吩基乙酰 98%乙酸酐 AR,98.5%(易制

          Diallyl phthalate2-苯硫基乙 98%乙酸酐 CP,96

          Dially isophthalate五氯苯硫酚 95%乙酸酐 GR(

          Dipentyl phthalate2-氨基二苯硫 98%正丁 AR,98.5%

          Dibutyl Adipate苯基乙烯基硫 98%*基氯硅烷 >98.0%(GC)

          DBM苯硫基乙酸 98%*基氯硅烷 Wacker quality, ≥99.0% (GC)

          Dibutyl phosphate二苯二硫 99%三乙基氯硅烷 98%

          DBS2-苯硫基炔 97%過氧化二異苯 99%

          Dicyclohexyl phthalateS-苯基硫代乙酸酯 98%二異 94%

          Diethyl adipate4-吡啶基吡啶氯鹽酸鹽 98%乙酸乙酯  for HPLC, >99.0%(GC)

          P-2044-苯基-3-硫代氨基脲 98%合聯(lián)氨 AR,50%溶液

          DIOP鄰苯二甲酰亞胺 99%合肼,一 98%

          DOS苯 色標(biāo)standard for GC ,>99.5% (GC)六甲基二硅胺烷 CP,97%

          DEP苯 98%六次甲基四胺  ≥99.5%(以干基計(jì))

          Diethyl sebacate苯 99%鄰硝苯 99%

          Diethyl succinate苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.8% (GC)鄰硝苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品

          三唑酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,溶劑:石油)SHP-1 (C14H6) Rabbit mAbLDHA/LDH  乳酸脫氫酶抗體

          甲基托布津(分析標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-IP3 Receptor (Ser1756) AntibodyLCMT1  亮氨酸羧基轉(zhuǎn)移酶1抗體

          無硫酸鈉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm)ASK1 AntibodyLck/p56-LCK  淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶抗體

          甲嘧磺隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Ubiquitin (Ser65) AntibodyL-Citrulline  L-瓜氨酸抗體

          西草凈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%)Phospho-ASK1 (Ser967) AntibodyLCHAD/HADHA  長鏈烯脂酰輔酶A脫氫酶抗體

          五氯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Phospho-ASK1 (Thr845) AntibodyLCEAH/ECHS1  長鏈烯脂酰輔酶A化酶抗體

          五氯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%,基體:苯)Thymidylate Synthase AntibodyLCE2B  晚期包膜蛋白2B抗體

          喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%)Phospho-TFEB (Ser211) (E9S8N) Rabbit mAbLCE1A  晚期包膜蛋白1抗體

          精喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)BNIP3 Antibody (Rodent Specific)LCAT  卵磷酯膽固?;D(zhuǎn)移酶抗體

          二甲戊樂靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)MLKL (D6W1K) Rabbit mAb (Mouse Specific)LCA5L  致盲基因LCA5樣蛋白抗體
          出血性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒英文名稱:Rat apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

          大鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit*

          大鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒 英文名稱:Rat Apolipoprotein H,Apo-H ELISA Kit進(jìn)口/分裝

          大鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA試劑盒 英文名稱:Rat regulated on activation in rmal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA Kit進(jìn)口/分裝

          大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒英文名稱:Rat lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit*

          大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒英文名稱:Rat lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA Kit進(jìn)口/原裝小鼠補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)ELISA試劑盒      組裝/原裝

          小鼠丙酸脫氫酶E1(PDHE1)ELISA試劑盒      組裝/原裝

          小鼠丙酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒      組裝/原裝

          小鼠丙酸激酶(PK)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
          檢測(cè)步驟:
          一、 試劑的準(zhǔn)備
          從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
          設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
          試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
          熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
          酶混合物 1 µL N×1 µL
          總量 15 µL N×15µL
          1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
          7.2 qPCR反應(yīng)條件
          將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
          推薦循環(huán)條件:
          1循環(huán) 50℃ for 2 min
          預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
          PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
          60℃ for 60 sec
          60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

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