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          當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  即用型PCR試劑盒(染料法)  -  50T即用型PCR試劑盒(染料法)

          即用型PCR試劑盒(染料法)

          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          氫酶1抗體Glutathione中文名:谷胱甘肽別名:分子式:C10H17N3O6S

          ADP核糖基化樣因子ARL3抗體Melatonin中文名:褪黑素別名:分子式:C13H16N2O2

          內(nèi)收蛋白a1抗體Dehydroevodiamine hydrochloride中文名:去氫吳茱萸堿鹽酸

          更新時(shí)間:2021-03-15
          訪問(wèn)次數(shù):1202
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          注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

           產(chǎn)品名稱

           即用型PCR試劑盒(染料法)

           規(guī)格

           50T

           貨號(hào)

           LZP7882

          組成及試劑配制:
          1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
          2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
          3、 樣品稀釋液:1×20ml。
          4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
          5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
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          實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
          一、試劑準(zhǔn)備
          1. DNA模板
          2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
          3.10×PCR Buffer
          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
          5.Taq酶
          二、操作步驟
          1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
          10×PCR buffer             5μl
          dNTP mixl                 4μl
          引物1(10pM)               2μl
          引物2(10PM)              2μl
          Taq酶(2U/μl)            1μl
          DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
          ddH2O至               50 μl
          PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
          2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
          3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
          4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
          三、注意事項(xiàng)
          1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
          2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
          3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
          4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
          5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
          6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
          7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
          二甲氨基甲酸(>98.0%(HPLC)(T))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb2-氧代環(huán)戊基酸酯

          5-(甲氧羰基基)-10,15,2-三基卟吩(>90.0%(HPLC))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb5-硝基吲哚-2-酮

          2-萘甲酸(>98.0%(GC)(T))Basic FGF (19A9) Rabbit mAb2-噻吩

          2-萘甲酰(>98.0%(GC)(T))EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb2-氟-溴-5-氨基吡啶

          甲酸(>99.0%(GC)(T))PKM2 Antibody2-氨基腺嘌呤核苷

          聯(lián)基-羧酸(>98.0%(T))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2,4,5-三氟

          基甲酰(>98.0%(GC)(T))SynGAP Antibody氨基-5-氟吡啶

          二甲基氨基肉桂(>98.0%(T))Yes Antibody2-氟三氟甲氧基

          2,萘二羧酸酐(>95.0%(GC)(T))eNOS (D9A5L) Rabbit mAb-2-氟

          N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基烷(>97.0%(GC))Androgen Receptor Antibody2--氟

          [(叔丁氧羰氨基)甲基]吡啶-2-羧酸(>96.0%(HPLC)(T))CDK9 (C12F7) Rabbit mAb (PE Conjuga)5,6-二甲氧基茚酮

          (鋅卟啉)(約5μmol/L的二溶液) Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb肉桂基

          (鋅卟啉)(約5μmol/L的二溶液)Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb溴聯(lián)

          五亞甲基雙[(10,15,20-三卟吩-5-基)甲酸]二鋅(Ⅱ)(>97.0%(HPLC))Pyruva Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAb6-溴吡啶-2-羧酸酯

          全氟三丁(>60.0%(GC))Pyruva Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAbN,N,N',N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟酸鹽

          2,4,6-三(十五氟庚基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))GPX1 Antibody二甲氨基酮

          2,4,6-三(五氟基)-1,3,5-三(>95.0%(GC))AMACR (2A10) Mouse mAb5-氨基-1H-咪唑-酰

          2,4,6-三(七氟基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))AP-2α Antibody2-氧基酸

          L氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒phospho-PKC delta (Thr505)  酸化蛋白激酶C亞性D型100 ul

          HSP90(IgM)ELISA試劑盒phospho-PKC delta (Tyr311)  酸化蛋白激酶C亞性D型20 ul

          HSP90(IgG)ELISA試劑盒PLAU/uPA  尿激酶型纖溶酶原激活因子100 ul

          HSP72(IgM)ELISA試劑盒PLAUR  尿激酶型纖溶酶原激活因子受體100 ul

          HSP72(IgG)ELISA試劑盒PLG  纖維蛋白溶酶原100 ul

          HSP60(IgM)ELISA試劑盒Plexin A1  神經(jīng)叢蛋白A1100 ul

          HSP60(IgG)ELISA試劑盒Plexin A2  神經(jīng)叢蛋白A2100 ul

          HSP27(IgG)ELISA kiPlexin B1  神經(jīng)叢蛋白B11 Kit

          HSP27 IgM ELISA試劑盒Plectin  網(wǎng)蛋白100 ul
          即用型PCR試劑盒(染料法)ASTE1蛋白抗體Tetrahydropalmatine中文名:延胡索乙素別名:(+)-Tetrahydropalmatine; 右旋四氫巴馬汀分子式:C21H254

          錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體L-Carnitine中文名:左旋肉堿別名:分子式:C7H153

          胞質(zhì)乙醛脫氫酶1抗體Glutathione中文名:谷胱甘肽別名:分子式:C10H17N3O6S

          ADP核糖基化樣因子ARL3抗體Melatonin中文名:褪黑素別名:分子式:C13H16N2O2

          內(nèi)收蛋白a1抗體Dehydroevodiamine hydrochloride中文名:去氫吳茱萸堿鹽酸鹽別名:分子式:C19H16N3O
          檢測(cè)步驟:
          一、 試劑的準(zhǔn)備
          從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
          設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
          試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
          熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
          酶混合物 1 µL N×1 µL
          總量 15 µL N×15µL
          1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
          7.2 qPCR反應(yīng)條件
          將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
          推薦循環(huán)條件:
          1循環(huán) 50℃ for 2 min
          預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
          PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
          60℃ for 60 sec
          60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

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