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          當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測(cè)試劑盒  -  50T河流弧菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

          河流弧菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          河流弧菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格
          上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
          Cpn-Ab檢測(cè)試劑盒 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

          更新時(shí)間:2021-03-13
          訪問(wèn)次數(shù):543
          詳細(xì)介紹在線留言

          注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

           產(chǎn)品名稱

           河流弧菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

           英文名稱

           Vibrio fluvialisPCR

           貨號(hào)

           LZP7456

          組成及試劑配制:
          1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
          2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
          3、 樣品稀釋液:1×20ml。
          4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
          5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
          ?
          實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
          一、試劑準(zhǔn)備
          1. DNA模板
          2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
          3.10×PCR Buffer
          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
          5.Taq酶
          二、操作步驟
          1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
          10×PCR buffer             5μl
          dNTP mixl                 4μl
          引物1(10pM)               2μl
          引物2(10PM)              2μl
          Taq酶(2U/μl)            1μl
          DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
          ddH2O至               50 μl
          PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
          2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
          3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
          4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
          三、注意事項(xiàng)
          1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
          2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
          3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
          4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
          5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
          6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
          7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
          Methyl Red mixed indicator powderFmoc-Cys(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB,0.3-0.8mmol/g草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:甲

          Methylene greenN-CBZ-D-天冬氨酸 98%殘殺威 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%

          Methyl GreenN-芐氧羰基-O-叔丁基-L-絲氨酸 98%殘殺威標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%

          Januˊs green BCBZ-D-纈氨酸 98%殘殺威標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%

          Resazurin sodium saltL-半胱氨酸(Trt)-NH2   98%草甘膦 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%

          Azure IIN'-(2-氯芐氧羰基)-L-鳥(niǎo)氨酸  98%草甘膦標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:

          Azure B2-氯-D-苯氨酸 98%草甘膦標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:

          Azure II eosin3-氯-D-苯氨酸 99%噠螨靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%

          Orange G63-氯-L-苯氨酸 98%多效唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(HPLC)

          Orange IV4-氯-D-苯氨酸甲酯鹽酸鹽 99%多效唑標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:甲

          Orange Ⅱ4-氯-DL-苯氨酸甲酯鹽酸鹽 98.5%多效唑標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:甲

          Orange ⅠN-芐氧羰基-D-苯氨  97%二甲戊樂(lè)靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%

          Auramine OL-胱氨酸二甲酯  97%二甲戊樂(lè)靈標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:酮

          Besmarck brown Y2-Chlorotrityl Chloride Resin 0.8-1.5mmol/g, 100~200 mesh二甲戊樂(lè)靈標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:酮

          Acridine orangeCalcitonin Gene Related Peptide Fragment 8-37 human猛殺威 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%

          AcriflavineCalcitonin Gene Related Peptide rat ≥97% (HPLC)咪鮮胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品,95.5%

          高嶺土(CP)Phospho-Jak1 (Tyr1034/1035) AntibodyMouse Anti-human IgM/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          超細(xì)高嶺土(325(44um))Jak1 AntibodyMouse Anti-human IgM/Cy5  Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          超細(xì)高嶺土(1250(11um))ALK (C26G7) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          超細(xì)高嶺土(3000(5um))RasGRP3 (C33A3) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Bio  生物素標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          超細(xì)高嶺土(6000(3.5um))Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Mouse Anti-human IgM/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          高嶺土(醫(yī)藥級(jí))ApoA5 (2G1H11) Mouse mAbMouse Anti-human IgM/AP  堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          硅藻土G(TLC)SMARCE1/BAF57 (E6H5J) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          硅膠(AR)S5a/PSMD4 (D17E4) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          二氧化硅(99.99%,1-3mm)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (APC Conjugate)Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgM

          石英砂(AR,6-10目或2-3mm)NME1/NDKA (G19) AntibodyMouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgM
          河流弧菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格綿羊肺成纖維細(xì)胞,OAR-L1細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

          SV40 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞,HFOB1.19細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

          B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞,RAMOS細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

          T淋巴瘤細(xì)胞,H9細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

          T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞,Jurkat,Clone E6-1細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

          人膀胱癌細(xì)胞,EJ細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
          檢測(cè)步驟:
          一、 試劑的準(zhǔn)備
          從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
          設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
          試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
          熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
          酶混合物 1 µL N×1 µL
          總量 15 µL N×15µL
          1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
          7.2 qPCR反應(yīng)條件
          將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
          推薦循環(huán)條件:
          1循環(huán) 50℃ for 2 min
          預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
          PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
          60℃ for 60 sec
          60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

           

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